结核性脑膜炎

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TUhjnbcbe - 2023/3/20 21:03:00

快速药敏试验

将预先浸有定量浓度的抗菌药物滤纸片,放在涂有被检细菌的培养基平板面上,纸片上抗菌药物通过琼脂向周围扩散,经37℃孵育后,在不同程序上抑制了敏感菌株的生长繁殖形成抑制圈,根据抑制圈的有无、大小,来判定该菌株对药物的敏感度。

纸片法操作简单,一个平板可以同时测定多种抗菌药物,也可使用原始标本中的细菌直接进行药敏试验。干燥药敏纸片易于保存,比临用时现浸抗菌药物的纸片使用方便,方法准确。

干燥药敏纸片的制备取新华一号定性滤纸,用打孔机轧成6毫米直径的小圆纸片,轧制纸片时以单层为好,以免粘连。

每张分装于经彻底洗刷烘干带有胶塞的小瓶中,高压灭菌后烘干。每瓶注入1毫升经稀释的抗菌药物溶液。滴加药液时要使纸片浸吸药液均匀,必要时稍加翻动。

浸吸30分钟后,将多余的药液倾掉,翻扣在灭菌的纸上或脱脂纱布上。置37℃~50℃烘干或真空干燥。

干燥好的抗生素纸片小瓶要立即塞紧胶塞,放在加有吸湿剂的密闭容器内备用。

培养基的准备以扩散法测定细菌对抗菌药物敏感试验用的培养基,要适于被测细菌的生长繁殖,又不致影响抗菌药物的扩散,所形成的抑制圈要清晰易见。

一般化脓菌(如葡萄球菌、绿脓杆菌)可使用普通琼脂平板或肉膏汤。如被测细菌为脑膜炎双球菌或肺炎双球菌则用1%肉膏汤和血平板。磺胺药物要用无蛋白胨琼脂培养基。抗结核药物使用血液青常素球脂。厌氧菌使用葡萄糖血液平板,置厌氧环境中培养。

菌液的准备培养基中加入的菌量与抑菌圈的大小、透明度、抑菌圈边缘清晰度都有一定的关系。一般菌量与抑菌圈大小成反比。接种在培养基表面菌液浓度的过大或过小都会影响抑菌圈的大小。接种菌液的含菌量为/毫升,每个平板接种0.01毫升。一标准接种环的细菌菌体,悬浮于10毫升灭菌生理盐水中大致相当于所需浓度。

试验方法

根据被测细菌的种类选择适用的培养基,用灭菌的棉拭子粘取上述经稀释的菌液均匀涂布后,稍干再用灭菌的小镊子取抗菌药物纸片平放于培养基表面,每张纸片之间距离应在3厘米以上。置于37℃温箱培养18小时,多黏菌素因在琼脂中扩散的慢(分子量大),可先在室温或4℃冰箱中放置4~6小时,然后再置于37℃温箱培养14~16小时。

结果判定测量抑菌圈直径包括纸片直径。抑菌圈直径大于15毫米为高度敏感,10~15毫米为中度敏感,小于10毫米为低度敏感,无抑菌圈为抗药。多黏菌素抑菌圈大于9毫米为高度敏感,小于9毫米为低度敏感,无抑菌圈为抗药。

致病菌对抗菌药物的敏感情况同临床应用效果大致是平行的,其符合率在70%以上。细菌的药敏浓度如高于临床使用量的血清中浓度即为耐药:药敏为血清中药物浓度的12-1/10时称中度或高度敏感;药敏浓度与血清浓度接近为轻度敏感。

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