临沂白癜风医院 http://m.39.net/pf/a_5837446.html引言
医院神经内科赵伟丽团队于《中华神经科杂志》发表了一篇应用二代测序诊断中枢神经系统感染性疾病的回顾性分析文章，对年3月至年9月于医院神经内科住院诊断为感染性脑炎与脑膜炎患者进行了回顾性分析，发现宏基因二代测序技术对感染性脑炎与脑膜炎的病原体检测较传统的病原学检测方法更敏感，在感染性脑炎与脑膜炎的精准化诊断方面具有优势。
资料与方法
01
入组标准
收集年3月至年9月在医院神经内科住院并确诊为CNS感染性疾病的患者；脑脊液二代测序入组标准符合《北京脑炎协作组脑炎诊断标准》。
排除标准包括：年龄≤28d；脑脊液细胞学证实脑膜恶性肿瘤；损伤所致明显血性脑脊液；已经确诊自身免疫性脑炎的病例；HIV、梅*感染或者拒绝签署知情同意书。
最终共入组例感染性脑炎/脑膜炎患者，其中男性61例，女性43例。患者及其家属均签署知情同意书，患者抽取适量脑脊液，送天津华大医学检验所进行mNGS检测，同时进行脑脊液的常规、生化、细胞学、病*抗体、涂片和血培养、PCR等检查验证试验。
02
方法
脑脊液mNGS由天津华大医学检验所检测，使用BGISEQ?50测序平台（华大基因）构建DNA文库，采用BGISEQ-50的测序平台进行测序。
相关定义：
（1）真阳性：mNGS检出病原体，且与患者临床表现及传统病原学检测方法等符合；
（2）假阳性：mNGS检出病原体，但与患者临床表现及传统病原学检测方法等不符合；
（3）假阴性：mNGS未检出病原体，但传统病原学检测方法阳性且临床符合。
03
统计学方法
采用统计学软件SPSS17.0对数据进行统计学分析
结果
01
入组标准
共纳入例被确诊为感染性脑炎/脑膜炎患者，其中男性61例，女性43例，年龄（44.77±18.14）岁。其中3例患者因病情变化行脑脊液mNGS检测2次。患者主要临床表现为发热、头痛、精神行为异常、意识障碍、癫痫发作、尿便障碍、心律失常等，所有患者的临床表现见表1。
患者入院后均完善腰椎穿刺检查，脑脊液白细胞计数中位数78.0（10.0，.5）×10^6/L，脑脊液蛋白中位数.0（.5，.5）mg/L，葡萄糖（3.29±1.74）mmol/L；氯化物（.35±7.44）mmol/L；83例（79.81%）患者完成脑脊液细胞学检查，57例（54.81%）表现为淋巴细胞性炎症，6例（5.77%）表现为中性粒细胞性炎症，6例（5.77%）表现为淋巴细胞伴中性粒细胞的混合性炎症。
02
脑脊液mNGS结果
例患者的脑脊液均检出病原体特异性序列。
mNGS病原体检测阳性并符合临床诊断的例数为49例，阳性率为47.12%（49/）。
在本研究中，21例（20.19%）出现假阳性，误报的病原体主要为细菌（18例）；与临床不符的假阴性患者有34例（32.69%），详见表2。
脑脊液mNGS病原体检测结果与临床验证情况见表3。
此外，大多数脑脊液样本存在一些背景菌污染。
讨论
mNGS的优势：
mNGS在CNS感染性疾病的阳性比例为47.12%，高于传统病原学检验。
通过mNGS诊断的49例CNS感染病例经抗感染治疗效果明显，证明与传统病原体检测方法相比，mNGS给临床医生诊断与治疗决策提供了很大帮助。这也提示在病原体诊断技术条件及医医院，脑脊液mNGS的应用是非常必要的。
在导致CNS感染的DNA病*中，水痘?带状疱疹病*排在首位，这一发现与以往对病原体谱的认识有所不同。
mNGS技术在CNS感染中的优势目前更多体现在对少见、罕见甚至未知病原体的检测，以往的PCR方法有赖于预设目标的病原微生物基因序列，而mNGS的无偏倚、随机的特性既可以检测基因组已知的病原体，还可以检测未知的新型病原微生物，成为发现新发感染性疾病的重要方法。
mNGS的不足：
判读mNGS结果的诊断意义仍然面临很多挑战。比起传统检测，mNGS检测会得到大量背景或者无关微生物基因片段，而标本取材与实验室检测中可能污染和混入微生物基因序列难以避免。污染的测序可能会影响结果的判断。这需要通过实验室质控和标本间数据的比对进行排除。
mNGS技术费用较传统病原微生物检测技术昂贵，对于病情反复，治疗期间合并新的感染的患者，难以通过本方法监测致病菌的变化，且无法同步给出药敏结果。
总之，脑脊液mNGS虽然还有待进一步完善与标准化，但已经为感染性脑炎与脑膜炎病因诊断带来了显著的进步。这种诊断方法可以促进早期诊断和治疗，能够识别新出现的感染病原体和新发感染性疾病。
推荐阅读前沿文献
宏基因二代测序在人工关节真菌感染中的应用前沿文献
培养法、mNGS、靶向定量PCR、靶向LAMP+CRISPR应用于检测感染性糖尿病足前沿文献
高龄患者危重症风险高3倍！华大测序平台助力揭示德尔塔变异株完整传播链及临床特征研究
